Главная > Медицина, здоровье > Принципи імуноферментного аналізу, основні види ІФА, застосування в діагностиці
Принципи імуноферментного аналізу, основні види ІФА, застосування в діагностиці25-01-2012, 10:25. Разместил: tester6 |
Принципи імуноферментного аналізу, основні види ІФА, застосування в діагностиці Реферат Самойлик Павло Володимирович інтерн кафедри В«Клінічної лабораторної діагностикиВ» Російський державний медичний університет 2009 Введення. Методи імунного аналізу широко ввійшли в медичну практику. У всіх областях сучасної медицини використовується імунний аналіз, переважно, з діагностичною і аналітичної цілями. Особливо важливо, що вони дають можливість ідентифікувати біологічні компоненти (гормони, ферменти, нейропептиди, продукти імунної системи, антигени і т.д.) в низьких і дуже низьких концентраціях. Всі продукти, проти яких можливе отримання антитіл, виявляються цими методами. Імунний аналіз грунтується на взаємодії антигену (АГ) та антитіла (АТ) з використанням різних варіантів мічення одного з компонентів (фермент, радіонуклід, флуоресцентний барвник та інші). Оцінка реакції проводиться автоматично на спеціальній апаратурі, що дозволяє стандартизувати ці методи. Залежно від типу використовуваної мітки і умов постановки тесту імунний аналіз позначається як імуноферментний (ІФА), радіоімунний (РІА), імунофлуоресцентного та інші. При постановці реакцій в один або декілька етапів вони позначаються як прямі або непрямі. Має значення середу, в якій проводиться реакція. Якщо реакція проводиться з реагентами, фіксованими на поверхні, то тест позначається як твердофазних, наприклад ELISA (enzyme linked immunosorbent assay). У даній роботі буде розглянуто тільки імуноферментний аналіз - метод широко поширений в біології та медицині, як практичної, так і фундаментальної. Імуноферментний аналіз. ІФА з'явився в середині 60-х років і спочатку був розроблений як метод для ідентифікації антигена в гістологічному препараті, а також для візуалізації ліній преципітації в тесті імунодифузії і іммуноелектрофореза, а потім став використовуватися для кількісного визначення антигенів і антитіл в біологічних рідинах. В розробці методу брали участі Є. Енгвалл і Р. Пелман, а також незалежно від них В. Ван Вееман і Р. Шурс.
Малюнок 1. Основний прінцип ІФА. 1) Для виявлення антигенів. 2) Для виявлення антитіл. Метод заснований на специфічному зв'язуванні антитіла з антигеном, при цьому один з компонентів кон'юговані з ферментом, в результатереакціі з відповідним хромогенним субстратом утворюється забарвлений продукт, кількість якого можна визначити спектрофотометрично (рис. 1). Відкриття можливості іммобілізації антигену та антитіла на різних носіях із збереженням їх зв'язує активності дозволило розширити використання ІФА в різних областях біології і медицини. Поява моноклональних антитіл послужило подальшому розвитку ІФА, що дозволило підвищити його чутливість, специфічність та відтворюваність результатів. Теоретично ІФА грунтується на даних сучасної імунохімії та хімічної ензимології, знанні фізико-хімічних закономірностей реакції антиген-антитіло, а також на головних принципах аналітичної хімії. Чутливість ІФА і час його проведення визначається декількома основними чинниками: кінетичними, термодинамічними характеристиками реакції антиген-антитіло, співвідношенням реагентів, активністю ферменту і роздільною здатністю методів його детекції. У загальному вигляді реакція антиген-антитіло може бути описана простою схемою: [AT] + [АГ] ↔ [Атаги] Різноманітність об'єктів дослідження від низькомолекулярних сполук до вірусів і бактерій, а також надзвичайно широке коло завдань, пов'язаних з різноманіттям умов застосування ІФА, обумовлюють розробку надзвичайно великої кількість варіантів цього методу. Будь-який варіант ІФА містить 3 обов'язкові стадії: 1. стадія впізнавання тестованого сполуки специфічним до нього антитілом, що веде до утворення імунного комплексу; 2. стадія формування зв'язку кон'югату з імунним комплексом або з вільними місцями зв'язування; 3. стадія перетворення ферментної мітки в реєстрований сигнал. Класифікація ІФА. В основу класифікації методів ІФА покладено кілька підходів: 1. За типом реагентів, присутніх на першій стадії ІФА, розрізняють конкурентний і неконкурентний методи. А) У конкурентному ІФА на першій стадії в системі присутні одночасно аналізоване з'єднання і його аналог, мічений ферментному і конкуруючий за центри специфічного зв'язування з ним. Б) Для неконкурентних методів характерна присутність в системі на першій стадії тільки аналізованого з'єднання і специфічних до нього центрів зв'язування. 2. Всі методи ІФА делют на гомогенні і гетерогенні. Якщо всі три стадії ІФА проходять в розчині і між основними стадіями немає додаткових етапів поділу утворилися імунних комплексів від непрореагіровавшіх компонентів, метод відноситься до групи гомогенних. В основі гомогенного ІФА, застосовуваного, як правило, для визначення низькомолекулярних субстанцій, лежить інгібування активності ферменту при його поєднанні з антигеном або антитілом. Активність ферменту відновлюється в результаті реакції антиген-антитіло. При зв'язуванні антитіла з антигеном, що містить ферментну мітку, відбувається інгібування активності ферменту на 95% по відношенню до високомолекулярних субстратів, що обумовлено стеричним винятком субстрату з активного центру ферменту. У міру збільшення концентрації антигену зв'язується все більше антитіл і зберігається все більше вільних кон'югатів антиген-фермент, здатних гідролізувати високомолекулярний субстрат. Аналіз проводять дуже швидко, для одного визначення потрібно 1 хвилина. Чутливість методу досить висока. З його допомогою можна визначити речовину на рівні пікомоль. Для гетерогенних методом характерне проведення аналізу в двофазної системі за участю твердої фази - носія, і обов'язкова стадія поділу імунних комплексів від непрореагіровавшіх компонентів (відмивання), які знаходяться в різних фазах (Утворилися імунні комплекси знаходяться на твердій фазі, а прореагували комплекси - в розчині). Гетерогенні методи, в яких формування імунних комплексів на першій стадії протікає на твердій фазі, називають твердофазного методами. Методи відносяться до гомогенно-гетерогенним, якщо 1 стадія - утворення специфічних комплексів відбувається в розчині, а потім для розділення компонентів використовують тверду фазу з іммобілізованими реагентом. 3. За принципом визначення тестованого речовини: А) Пряме визначення концентрації речовини (антигену або антитіла) по числу провзаімодействующіх з ним центрів зв'язування. У цьому випадку ферментна мітка буде знаходитися в утворився специфічному комплексі АГ-АТ. Концентрація визначуваної речовини буде прямо пропорційна регистрируемому сигналу. Б) Визначення концентрації речовини по різниці загального числа місць зв'язування і залишилися вільними центрів зв'язування. Концентрація визначуваної речовини при цьому буде зростати, а реєстрований сигнал знижуватися, отже, в даному випадку простежується зворотна залежність від величини реєстрованого сигналу. Характеристика компонентів, використовуваних в ІФА. Ферменти. Ферментні мітки володіють надзвичайно мощьний каталітичним дією, одна молекула ферменту може реагувати з великою кількістю молекул субстрату. Таким чином, фермент, присутній в незначних кількостях, можна виявити і кількісно визначити по утворенню продуктів, що каталізується їм реакції. Інша перевага застосування ферментів в якості міток обумовлено наявністю в молекулі численних функціональних груп (сульфгідрильних, карбоксильних, залишків Тирозин та ін), через які можна ковалентно приєднати молекули ліганду. Ферментні маркери, які використовуються в ІФА, повинні мати наступні властивості: - висока активність і стабільність фермен...ту в умовах аналізу, при модифікації і в кон'югату з антитілами або іншими білками; - наявність чутливих субстратів і простота методу визначення продуктів чи субстратів ферментативної реакції; - можливість адаптації субстратні систем до подальшого посилення; - відсутність ферменту і його інгібіторів в досліджуваній біологічної рідини. В ІФА може використовуватися не менше 15 різних ферментів. Найбільше застосування, в Відповідно до вищеназваними вимогами, знайшли пероксидаза хрону (ПХ), лужна фосфотаза (ЩФ) і ОІ-D-галактозидаза (табл.1). Всі три стабільні і каталізують високочутливі реакції. Крім того, продукти, одержувані в Внаслідок реакцій, каталізуються цими ферментами, в залежності від використовуваного субстрату, можуть виявлятися не тільки колориметричною методами, але також флуоресцентними методами. Інші ферменти використовуються значно рідше. Це пояснюється їх більш низькою у порівнянні з ПХ і ЩФ питомої активністю. Субстрати. Вибір субстрату в першу чергу визначається використовуваним в якості мітки ферментом, так як реакція фермент-субстрат високо специфічна. Основні вимоги до субстрату: - забезпечення високої чутливості методу при виявленні ферменту в кон'югату; - утворення добре враховуються (наприклад, забарвлених) продуктів реакції фермент-субстрат; - субстрат повинен бути безпечним, дешевим, доступним і зручним для застосування. Таблиця 1. Ферменти та їх субстрати найбільш широко використовувані в ІФА. Фрмент Джерело отримання М.М. (КДа) Субстрат (Рекомендована довжина хвилі при фотометрії, нм) кон'югується реагент Пероксидаза хрону Хрін (Armoracia rusticana) 40О-фенілендіаміндігідро-хлорид (ОФД, 492 нм) 5-аміносаліцилова кислота (450 нм), діамінобензідін, про-діанізідін. глутаральдегідом Мета-періодат натрію N-сукцініміди-3 (2-піріділдітіо) пропіонат ОІ-D-Галак-тозідаза E. Coli 540 О-нітрофеніл-ОІ-D-галактозид (420 нм) Мета-малеімідобензол-N-гідроксісукцінімідний ефір Лужна фосфотаза E. Coli, слизова кишечника теляти 84-150 Р-нітрофенілфосфат (405 нм), 5-Бром-4-хлоро-3-індол фосфат глутаральдегідомНайчастіше використовують хромогенних субстратів, які, руйнуючись, утворюють забарвлене речовина. Перспективним є використання високоенергетичних субстратів - флуоресцентних, хеміпюмінесцентних. Застосування таких субстратів дозволяє теоретично підвищити чутливість ІФА на два порядки. Антигени і антитіла. АГ і AT, що використовуються в ІФА, повинні бути високоочішеннимі і високоактивними. Крім того, АГ повинні володіти високою антигенів, оптимальною щільністю розташування та кількістю антигенних детермінант, чужеродностью і гомогенністю. Багато синтетичні та рекомбінантні АГ вірусів і бактерій добре себе зарекомендували при використанні в ІФА. Це істотно підвищило специфічність і відтворюваність методу за рахунок зведення до мінімуму перехресних реакцій. Одним з найбільш важливих реагентів в ІФА є антитіла. Чутливість ІФА залежить від концентрації, активності та специфічності використовуваних антитіл. Використовувані антитіла можуть бути полі-або моноклінально, різного класу (IgG або IgM) і підкласу (IgGl, IgG2), антіаллотіпіческімі або антіідіотіпіческіх. При низькій афінності AT розпад комплексу АГ-АТ призводить до видалення пов'язаного АГ з системи. Чутливість і специфічність методу підвищується при використанні моноклональних антитіл. У цьому випадку з'являється можливість виявляти низькі концентрації АГ (AT) у випробовуваних зразках. Освіта кон'югату Кон'югат - це антиген або антитіло, мічені ферментної міткою. Освіта коньюгата - один з важливих етапів проведення ІФА. При формуванні кон'югату підбирають такий оптимальний метод введення ферментної мітки, щоб обидва компоненти кон'югату зберігали свою біологічну активність: фермент - здатність взаємодіяти з субстратом, а антиген або антитіло - антигенність та антигензв'язуючих активність, відповідно. Наявність міченого, високоочищеного антигену дозволяє використовувати конкурентні методи. У цьому випадку на кінцевому етапі можна вимірювати активність кон'югата, не пов'язаного з іммобілізованими антитілами, що дозволяє уникнути процедури відмивання і робить аналіз більш зручним. Однак антигени різноманітні за своїми фізико-хімічними властивостями та будовою, а значить неможливо розробити універсальні методики для отримання кон'югату з антигеном. У цьому випадку одержання кон'югату антигену з ферментом являє собою окрему складну задачу. Приготування мічених антитіл для ІФА методично більш доступно. кон'югірованію ферменту з імунохімічних активними білками виробляється різними методами: хімічна зшивка, ковалентное зв'язування молекули ферменту з АГ або AT і освіта з'єднань через Нековалентні зв'язку, наприклад, коли зв'язок між ферментом і АГ або AT здійснюється імунологічно, через взаємодію антиген-антитіло. Найбільш широке поширення набули ковалентні способи приготування кон'югатів. Вибір реакції зв'язування визначається типом доступних функціональних груп в даних білкових молекулах. В якості реагентів, що використовуються для введення ферменту в молекули антигенів і антитіл, використовують глутаровий альдегід, періодат натрію і ін Існує одноетапний і двоетапний методи отримання кон'югатів за допомогою глутарового альдегіду. Можуть утворюватися кон'югати різних розмірів з редуцированной ферментативної активністю (15 - 60% від вільного ферменту). Утворився кон'югат великих розмірів може стерически ускладнювати визначення тестованого речовини. Кон'югати з відносно низькою молекулярною масою складаються з Fab-фрагмента і однієї молекули ферменту. В результаті двохетапного синтезу, який полягає в поетапному отриманні спочатку модифікованого з допомогою агента, що зшиває ферменту, його виділення, а потім подальшому взаємодії його з антигеном (антитілом), утворюються молекули однорідного складу, які містять 1-2 молекули ферменту на молекулу імуноглобуліну і зберігають високу ферментативну і імунологічну активність. Однак кількість таких утворилися кон'югатів невелика (для пероксидази хрону становить 5 - 10%). Найбільше практичне застосування знайшов метод отримання імунопероксидазному кон'югатів, заснований на окисленні вуглеводного компонента ферменту періодатом натрію (зв'язування пероксидази в кон'югат досягає 70-90% від початкової кількості ферменту). Надійний кон'югат повинен володіти наступними властивостями: - високим антитільним тигром і високою афінністю до антигену, щоб його можна було використовувати в великому розведенні, і таким чином, зменшити неспецифічне зв'язування; - достатньою специфічністю в робочому розведенні; - переважанням мономерних форм над полімерними, тому полімерні форми мають тенденцію до неспецифічної адгезії на пластику, що призводить до високого фонового рівня реакції; - оптимальним молярним співвідношенням між ферментом і антитілами (оптимальне співвідношення становить близько 1:1); - достатньою ферментативною активністю кон'югату. Ця властивість визначається головним чином умовами кон'югації і співвідношенням молекул ферменту і антитіл в кон'югату. Тверда фаза В якості твердої фази для проведення ІФА можна застосовувати різні мат...еріали: полістирол, полівінілхлорид, поліпропілен та інші речовини. Твердою фазою можуть служити стінки пробірки, 96-лункові та ін планшети, кульки, намистини, а також нітроцелюлозні і інші мембрани, активно сорбуючі білки. Іммобілізація антигену або антитіл на твердій фазі можлива трьома шляхами: - пасивна адсорбція, заснована на сильних гідрофобних взаємодіях між білками і синтетичної поверхнею; - ковалентное прикріплення до твердої фазі; - імунохімічних та ін (Нековалентно і неадсорбціонное приєднання). Пасивна адсорбція білків широко використовується при проведенні ІФА на платах для титрування, на нітроцелюлозних мембранах. Пасивна адсорбція йде за принципом насичення і корелює з молекулярною масою адсорбируемого речовини. Адсорбційна поверхню мембран різного типу (нітроцелюлоза, нейлон та ін) в 100-1000 разів вище, ніж у пластика. Полісахариди і сільноглікозілірованние білки часто мають низьку афінність для полістиролу. Необхідні інші методи для їх іммобілізації, наприклад, ковалентное приєднання за допомогою глутарового альдегіду. Ковалентное приєднання ефективно, якщо в якості твердої фази використовуються гідрофільні намиста (Агарози) і полістиролових намиста. Імунохімічні методи грунтуються на використанні попередньо адсорбованих В«ловушечногоВ» антитіл для іммобілізації антигену або антитіл. Антиген, іммобілізований імунохімічних, в 10 разів активніше, ніж пасивно адсорбований антиген. Можуть використовуватися лектини або імуноглобулін-зв'язуючі білки бактерій, які легко адсорбуються на пластиці або інших гідрофобних поверхнях, наприклад конканавалін А (Кон А) або стаффілококковий білок А. Кон А здатний іммобілізувати gp 120 - білок вірусу ВІЛ. Вільні сайти на поверхні твердої фази, не пов'язаних з сорбіруємості агентом, можуть фіксувати в ході тесту інші молекули, в тому числі і кон'югати, що призводить до підвищення фонового сигналу. Для запобігання неспецифічного зв'язування В даний час 1. 2. комплекси. 3. При додаванні Цю реакцію аналізу. Для 1. Вище зазначалося, що Контроль. В якості 2. 3. Зв'язування 4. По досягненні 5. Спочатку
Малюнок 2. та ін.) Основне зразках. 1. 2. 3. 4. Додають 5. 6. Для методичних прийомів. При проведенні цього антиген-антитіло. 1. антитіла. 2. 3. Після 4. 5. Основною перевагою
Малюнок 3. антитіл. Основні етапи аналізу 1. 2. 3. 4. Облік реакції на Для проведення1.
Малюнок 4. 2. Проводять 3. 4. 5. результатів. Концентрація(Наприклад, цитокіни), in vitro. Метод отримав назву ELISPOT (Метод імуноферментних зон або плям). Основний принцип методу: 1. На поверхні полистироловой лунки (використовують 24-х лункові панелі для культивування клітин) сорбують антигени або антитіла, які служать В«ловушечногоВ» реагентами. 2. Додають досліджувані лімфоїдні клітини, культивують кілька годин при 37 В° С, даючи їм можливість зайняти певне місце і виконати секреторну функцію. Антитіла або антигени, секретуються такими клітинами, уловлюються адсорбованими на твердій фазі реагентами. 3. Клітини видаляють, використовуючи для цього відмивають розчин з детергентом, лізує клітини. 4. Ділянки накопичення секреторних продуктів проявляють, додаючи пов'язані з ферментом антитіла (Антіглобуліновой реагент). 5. Додають суміш субстрату з агарози (використовувані субстрати повинні розчинятися в агарозе і утворювати нерозчинні продукти реакції), на поверхні твердої фази утворюються коричневі або блакитні плями (залежно від використовуваних ферментів і субстратів), виявляючи ділянки, де розташовувалися клітини. • Утворилися плями підраховують під мікроскопом, це і буде кількість секретирующих клітин. В якості твердої фази може бути використана нітроцелюлозна мембрана У цьому випадку є ряд переваг: через високу адсорбційної здатності НЦМ потрібно значно меншу кількість антигену, використовуваного в якості В«ловушечногоВ» реагенту, крім того, відпадає необхідність у включенні агарози в субстрат. При паралельному визначенні кількості секретирующих клітин і загальної кількості секретируемого антигену або антитіла в лунці, що можливо при використанні іншого субстрату, можна виявити кількість секретируемого речовини одиничної клітиною. Даний метод знайшов широке застосування для оцінки кількості клітин, які секретують антиген, уловлює адсорбованими антитілами, використовується для визначення кількості клітин, які секретують цитокіни (ІЛ-1, ІЛ-2, ІЛ-4, ІЛ-6, ІФН-у, ФНП-а). Системи посилення сигналу. При використанні високоаффінних антитіл чутливість окремих варіантів ІФА дуже висока і теоретично дозволяє виявити одиничні молекули антигену, але на практиці чутливість обмежується низкою факторів: активністю ферменту, інтенсивністю сигналу і методами обліку сигналу. Системи посилення сигналу дають можливість підвищувати чутливість різних варіантів ІФА. Розглянемо деякі такі системи: На основі взаємодії авидин-біотин. Молекули коферменту біотину (м.м. 244 Да) кон'югуються з антитілами за допомогою Біотин-N-гідроксісукціміда. Невеликих розмірів молекулу біотину простіше приєднати до імуноглобуліну або іншому білку без порушення його імунних або ферментативних властивостей. Фермент в цьому випадку пов'язують з глікопротеїном яєчного білка авідіна. Аффінносгь зв'язування авідіна з біотином дуже висока (Константа дисоціації комплексу - 10-15 моль), кон'югат авидин-фермент міцно фіксується на комплексі антиген-антитіло-біотин. Після додавання відповідного субстрату проводять визначення продукту реакції спектрофотометрично або по інтенсивності люмінесценції. Одна молекула авідіна складається з чотирьох ідентичних субодиниць, здатна взаємодіяти з чотирма молекулами біотину, що дозволяє використовувати його як сполучну молекулу між двома біотінсодержащімі сполуками. У цьому випадку фермент теж біотініліруют, а авидин виконує функцію містка, з'єднуючи дві молекули, що містять залишки біотину. До утворився комплексу антиген-антитіло-біотин додають вільний авидин, а потім біотінілірованние фермент. Проводять облік реакції. Білок авидин може неспецифічно сорбироваться на інших молекулах, тому все частіше використовують інший біотінсвязивающій білок - стрептавідін, виявлений в бактеріях Streptomyces avidinii. Стрептавідін також утворює міцний комплекс з біотином і складається з чотирьох ідентичних субодиниць. Застосування авидин-біотінового комплексу дозволяє значно підвищити чутливість ІФА, так як при синтезі кон'югату з однією молекулою АТ можна пов'язати десятки молекул біотину. Отримання кон'югатів (антитіл і ферментів з біотином) здійснюється досить легко і супроводжується мінімальними змінами їх імунологічної і ферментативної активності. Кон'югати ферментів з біотином можуть бути використані як універсальні реагенти. Використання хемілюмінесцентних реакцій. хемілюмінесцентного реакції можна використовувати для отримання сигналу в ІФА, при цьому підвищується чутливість методу і скорочується час проведення аналізу. В якості мітки в ІФА широко застосовують пероксидазу хрону, для її виявлення можна використовувати і різні хемілюмінесцентного реакції. Хемілюмінесцентного реакції засновані на здатності люминола світитися при окисленні перекисом водню. В прямому аналізі при ферментативної реакції утворюється перекис водню і окисляє люмінол, каталізатором цієї реакції виступає пероксидаза хрону. Для посилення сигналу використовуються різні сполуки, наприклад, люциферин, феноли, в цьому випадку інтенсивність люмінесценції посилюється в 10-100 разів, в окремих варіантах в 500 разів (посилений хемілюмінесцентний аналіз). Люмінесцентний сигнал дуже стабільний, його рівень досягає максимуму за 30 с (д...ля порівняння: кольорова реакція з ОФД в якості індикатора повністю розвивається лише за 30 хв). При непрямому аналізі люмінолом або його похідними метится антитіло. Така мітка у вільному стані здатна окислюватися перекисом водню з виділенням світла. Якщо вона утворила комплекс, то втрачає здатність окислюватися. На основі каскадних систем. Для підвищення чутливості ІФА можна використовувати ферментні каскадні системи. У цьому випадку перший фермент, пов'язаний з антитілами, призводить до утворення відновлюваного субстрату для другої ферментної системи. Друга ферментна система може бути субстрат-циклічної або редоксіцікліческой. Ферментними мітками в цьому випадку можуть служити фосфо-глюкоізомераза, альдолаза, лужна фосфатаза. Кінцевий продукт реакції визначають візуально або спектрофотометрично. Системи ампліфікації в ІФА дозволяють домогтися високої чутливості. Такі ІФА-системи використовуються для визначення рівня гормонів (ти-реостімулірующего, прогестерону та ін). Практичне застосування ІФА. ІФА знайшов широке застосування в різних областях медицини і біології завдяки відносній простоті і високої чутливості методу. ІФА успішно застосовується для: • масової діагностики інфекційних захворювань (виявлення різних специфічних антигенів або антитіл до них); • виявлення і визначення рівня гормонів і лікарських препаратів у біологічних зразках; • визначення ізотипів (IgG, IgM та інші) антитіл проти конкретного антигену; • виявлення імунних комплексів; • виявлення онкомаркерів; • визначення білків сироватки крові (феритин, фібронектину і ін); • визначення загального IgE і специфічних IgE антитіл; • скринінгу моіоклональних антитіл; • визначення цитокінів в біологічних рідинах. Чутливість методу ІФА прийшов на зміну широко використовуваним раніше в клінічній практиці методам аглютинації, преципітації і РІА. В порівнянні з вищеназваними методами ІФА менш трудомісткий і менш тривалий за часом, зручний для виконання великої кількості однотипних аналізів. В ІФА поєднується унікальна специфічність імунохімічної аналізу з високою чутливістю визначення ферментної мітки. Чутливість методу (під чутливістю подразумевают мінімальне виявляється кількість антитіл або антигену) визначається наступними факторами: аффінністю антитіл, переважніше використання моноклональних антитіл; специфічною активністю ферменту; інтенсивністю сигналу; чутливістю обліку сигналу. Різні варіанти ІФА розрізняються за своєю чутливості. Окремі варіанти твердофазного ІФА дозволяють виявляти в зразку одиничні молекули. Середня чутливість ІФА - 10-9 - 10-12 моль. Список літературиГалактіонов В.Г. Імунологія. Видавництво Московського університету, 1998 р. Кишкун А.А. Імунологічні дослідження та методи діагностики інфекційних захворювань в клінічній практиці. Медичне інформаційне агентство, 2009 р. Кондратьєва І.О. Практикум з імунології. Навчальний посібник для ВНЗ. Академія, 2004 р. Лефковітс І., Перніс Б. Імунологічні методи дослідження. Світ, 1988 р. Ройт А., Бростофф Д., Мейл Д. Імунологія. Світ, 2000 р. Соколов Є.І. Клінічна імунологія. Медицина, 1998 р. Фрімель Г. Імунологічні методи. Медицина, 1987 р. Хаитов Р. М. Імунологія. Медицина, 2000 р. Шігіна Ю.В. Імунологія: Навчальний посібник. Видавництво РІОР, 2007 р. Ярилин А.А. Основи імунології. Медицина, 1999 р. |