1. Дослідження крові тварин
До спеціальних методам дослідження крові вдаються у тих випадках, коли необхідно і можливо встановити діагноз на рівні вивчення морфологічних характеристик клітин в мазку або зміни їх функціональних властивостей під впливом різних факторів. У першому випадку дослідження ведуть з використанням цитохімічних барвників, специфічно реагують з певними включеннями або компонентами клітин; функціональні властивості клітини визначають як відповідь на фізико-хімічні впливи [6].
1.1 Правила взяття крові у тварини
Умови взяття крові і її збереження до початку лабораторних досліджень мають важливе значення при отриманні достовірних результатів. Багато в чому ці результати залежать від техніки взяття крові і використовуваних при цій інструментів. В організмі розрізняє артеріальну, венозну та капілярну кров, яка має незначні цитологічні та біохімічні відмінності. Для морфологічних досліджень користуються майже виключно капілярною кров'ю, а при біохімічних - Венозної.
Капілярну кров беруть з внутрішньої поверхні вушної раковини. Шерсть на місці взяття крові вистригають, очищають місце уколу ватним тампоном, змоченим спиртом-ефіром. Укол роблять на глибину до 2 мм. Першу краплю крові стирають, тому вона містить випадкові домішки і лімфу, а наступні беруть для дослідження. Дуже важливо, щоб кров витікала з ранки без натискання на тканини, інакше вона змішується з лімфою і змінює свій клітинний і біохімічний склад. Закінчення крові можна прискорити, якщо заздалегідь прогрівати місце уколу в теплій воді або джерелом сухого тепла (фен, електролампа).
При венепункції прокол оточуючих вену тканин і стінки вен роблять в один прийом. Голки для взяття крові повинні бути з коротким зрізом і досить великим діаметром, щоб не травмувати протилежну стінку вени і не викликати ушкодження еритроцитів. Попередньо голки стерилізують кип'ятінням в 1%-му розчині бікарбонату натрію, місце вкола обробляють аналогічно отриманню капілярної крові.
При взятті крові з яремної вени голку вколюють на межі переходу верхньої третини шиї в середню. Щоб викликати достатню наповнення вени і зменшувати її рухливість, вену здавлює в середині шиї гумовим джгутом або пальцем. При проколі вени необхідно тримати голку в руці так, щоб напрямок її співпало з лінією ходу вени і щоб зріз голки був спрямований вгору, до голови. Голку вколюють під гострим кутом - в 20-30 В°. При попаданні у вену з голки витікає кров.
Кров повинна стікати по стінці пробірки по уникнення руйнування еритроцитів і при необхідності негайно змішуватися з достатньою кількістю антикоагулянта.
Перед витягом голки з вени гумовий джгут знімають, пережимають вену пальцем вище місця вкола, голку витягують, а місце вкола деякий час здавлюють тампоном для запобігання утворення гематоми. У висновку область венепункції дезінфікують настоянкою йоду і заливають Колодієм [3].
В залежності від характеру досліджень готують певну кількість пробірок. Стінки скляного посуду здатні обмінюватися іонами з кров'ю, а сліди миючих засобів і пошкоджені пробірки впливають на активність, ферментів. Це можна виключити, якщо використовувати пластмасові, пробірки одноразового користування; для деяких досліджень стінки скляних пробірок покривають шаром парафіну або силіконового масла.
В залежності від завдань дослідження аналізу піддають цільну кров, плазму або сироватку.
У цільній крові визначають морфологічні показники, а також вміст глюкози, кетонових тіл, міді, цинку, кобальту, марганцю, селену та ін, тобто речовин, рівномірно розподілених між плазмою та еритроцитами. Для дослідження речовин, нерівномірно розподілених між клітинами і рідкою частиною крові, слід використовувати сироватку або плазму. У сироватці, наприклад, досліджують загальний білок і його фракції, залишковий азот, сечовину, вільні амінокислоти, ліпіди, холестерин, білірубін, кальцій, неорганічний фосфор, магній, йод, пов'язаний з білком (СБЙ), каротин, вітаміни, ферменти та ін У плазмі - резервну лужність, вміст натрію, калію, неорганічного фосфору, магнію, каротину, вітамінів А, С та ін
Для отримання проби цільної крові або плазми її стабілізують, тобто в пробірку вносять антизсідальної речовина - антикоагулянт. Антикоагулянти краще застосовувати в вигляді розчинів.
Для отримання сироватки пробірки з кров'ю рекомендується в процесі взяття крові поміщати в термостат з температурою до 38 В° С. При масових обстеженнях тварин таким імпровізованим термостатом може бути достатня ємність з водою зазначеної температури. Після завершення робіт щодо взяття крові, згорнувся проби обводять тонкої спицею з нержавіючої сталі для кращого відділення сироватки і ставлять в термостат при 37-38 В° С на 1-2 години для остаточного відділення сироватки. Сироватку зливають і центрифугують 20 хвилин при 2000-3000 об/хв.
Для отримання плазми кров з антикоагулянтом центрифугують 20-30 хвилин при 2000-3000 об/хв. Плазма крові відрізняється від сироватки наявністю фібриногену.
Цільну кров, плазму і сироватку для нетривалого зберігання поміщають в холодильник (+2 ... +4 В° С), тривале зберігання сироватки вимагає температури - 20 В° С.
Порушення умов зберігання проб може стати причиною похибок аналізу. В результаті тривалого стояння сироватки, над еритроцитами можуть наступити зрушення в концентрації ряду компонентів: підвищується концентрація калію, активності кислої фосфатази, амінотрансфераз, лактатдегідрогенази, гидроксибутиратдегидрогеназы, знижується вміст глюкози внаслідок гліколітичних процесів. При температурі близько 20 В° С в цільній крові зростає вміст аміаку, багато ферментів навіть при температурі холодильника швидко втрачають свою активність (креатинкінази, кисла фосфатаза), в лактатдегідрогеназа, навпаки, швидше втрачає активність при низьких температурах [3].
Виниклий при взяття або зберіганні гемоліз еритроцитів призводить до підвищення концентрації калію, активності кислої фосфатази, амінотрансфераз, лактатдегідрогенази, гидроксибутиратдегидрогеназы. Невміле струшування проб при перемішуванні їх вмісту або при транспортуванні також може викликати гемоліз еритроцитів.
При проведенні спеціальних досліджень потрібно уважно стежити за виконанням особливих, обумовлених в описі методик правил взяття, консервації та зберігання проб крові [5].
1.2 Визначення швидкості осідання еритроцитів (ШОЕ)
Швидкість осідання еритроцитів (ШОЕ) - неспецифічний лабораторний показник крові, відображає співвідношення фракцій білків плазми; зміна ШОЕ може служити непрямою ознакою поточного запального або іншого патологічного процесу. Проба грунтується на здатності еритроцитів в позбавленою можливості згортання крові осідати під дією гравітації. У нормі величина ШОЕ у собак не перевищує 2-5 мм/год, а у кішок - 6-10 мм/год.
Принцип методу полягає в наступному. Питома маса еритроцитів перевищує питому масу плазми, тому вони повільно осідають на дно пробірки. Швидкість, з якою відбувається осідання еритроцитів, в основному визначається ступенем їх агрегації, тобто їх здатністю злипатися разом. Через те, що при утворенні агрегатів зменшується відношення площі поверхні частинок до їх обсягу, опір агрегатів еритроцитів тертю виявляється менше, ніж сумарне опір окремих еритроцитів, тому швидкість їх осідання збільшується. Агрегація еритроцитів головним чином залежить від їх електричних властивостей і білкового складу плазми крові. У нормі еритроцити несуть негативний заряд і відштовхуються один від одного. Ступінь агрегації (а значить і ШОЕ) підвищується при збільшенні концентрації в плазмі так званих білків гострої фази - маркерів запального процесу. В першу чергу - фібриногену, C-реактивного білка, церулоплазміну, імуноглобулінів та інших. Навпаки, ШОЕ знижується при збільшенні концентрації альбумінів. <...
