Пігментний обмін
Під пігментним обміном подразумевают зазвичай всі процеси утворення, перетворення і розпаду пігменту крові (гемоглобіну), точніше його пігментного небілкової частини, і головного деривата цього пігменту-жовчного пігменту (білірубіну). В даний час проте відомі й інші пігменти, які по хім. складом по - видимому, близькі Нь - це-нь м'язів, цитохроми, дихальний фермент Варбурга (Warburg) та інші ще вельми мало вивчені пігменти. Відокремити процеси утворення, перетворення і розпаду цих пігментів від процесів обміну НЬ поки неможливо. У більш широкому сенсі під П.. про. можна мати на увазі процеси утворення, перетворення і розпаду всіх пігментів організму, тобто як вищеперелічених пігментів, групи Нь, так і всіх інших пігментів-меланіну, липохромов і т. д.
ФІЗІОЛОГІЯ Обміну білірубіну
Процес перетворення вільного (непрямого) білірубіну, що утворюється при руйнуванні еритроцитів і розпаді гемоглобіну в органах ретикулоендотеліальної системи (РЕС), в білірубін-диглюкуронід (пов'язаний, або прямий білірубін) в печінковій клітині (мал. 1) здійснюється в три етапи (на малюнку позначені римськими цифрами):
Рис. 1. Процеси знешкодження вільного (непрямого) білірубіну і мезобіліногена (уробіліногену) в печінковій клітці.
БН - вільний (непрямий) білірубін; Б-Г - білірубін-глюкуронід (пов'язаний, або прямий білірубін); МБГ - мезобіліноген (уробіліноген).
Римськими цифрами позначені етапи знешкодження
1. I етап - захоплення білірубіну (Б) печінкової клітиною після відщеплення альбуміну;
2. II етап - утворення водорозчинного комплексу білірубін-диглюкуронід (Б-Г);
3. III етап - виділення утворився пов'язаного (прямого) білірубіну (Б-Г) з печінкової клітини в жовчні канальці (Проточки).
Подальший метаболізм білірубіну пов'язаний з надходженням його в жовчні шляхи і кишечник. В нижніх відділах жовчовивідних шляхів і кишечнику під впливом мікробної флори відбувається поступове відновлення зв'язаного білірубіну до уробіліногену. Частина уробіліногену (мезобіліноген) всмоктується в кишечнику і по системі ворітної вени знову потрапляє в печінку, де в нормі відбувається практично повне його руйнування (див. рис. 1). Інша частина уробіліногену (стеркобіліноген) всмоктується в кров в гемороїдальних венах, потрапляючи в загальний кровотік і виділяючись нирками з сечею у незначних кількостях у вигляді уробіліну, який часто не виявляється клінічними лабораторними методами. Нарешті, третя частина уробіліногену перетворюється на стеркобілін і виділяється з калом, обумовлюючи його характерну темно-коричневе забарвлення.
Методи визначення білірубіну та його метаболітів
Визначення білірубіну в сироватці крові
У клінічній практиці використовуються різні методи визначення білірубіну та його фракцій в сироватці крові.
Найбільш Найпоширенішим з них є біохімічний метод Ендрассіка-Грофа . Він заснований на взаємодії білірубіну з диазотированного сульфаниловой кислотою з утворенням азопігментов. При цьому зв'язаний білірубін (Білірубін-глюкуронід) дає швидку (В«прямуВ») реакцію з диазореактивом, тоді як реакція вільного (не зв'язаного з глюкуронідом) білірубіну протікає значтельно повільніше. Для її прискорення застосовують різні речовини-акселератори, наприклад кофеїн (метод Ендрассіка-Клеггорна-Грофа), які звільняють білірубін з білкових комплексів (В«непрямаВ» реакція). В результаті взаємодії з диазотированного сульфаниловой кислотою білірубін утворює забарвлені сполуки. Вимірювання проводять на фотометрі.
ХІД ВИЗНАЧЕННЯ
У 3 пробірки (2 досвідчені проби і неодружена) вводять реактиви, як вказано в таблиці. Діазореакція
Інгрідієнти
Досвідчена проба мл
Холоста проба мл
Загальний білірубін
Зв'язаний білірубін
Сироватка
0,5
0,5
0,5
Кофеїновий реактив
1,75
-
1,75
Розчин хлориду натрію
-
1,75
0,25
Діазосмесь
0,25
0,25
-
Для визначення зв'язаного білірубіну вимір проводять через 5-10 хв після додавання діазосмесі, так як при тривалому стоянні в реакцію вступає незв'язаний білірубін. Для визначення загального білірубіну пробу для розвитку забарвлення залишають стояти 20 хв, після чого вимірюють на фотометрі. При подальшому стоянні забарвлення не змінюється. Вимірювання проводять при довжині хвилі 500-560 нм (Зелений світлофільтр) в кюветі з товщиною шару в 0,5 см проти води. З показників, отриманих при вимірюванні загального та зв'язаного білірубіну, віднімають показник холостий проби. Розрахунок проводять по каліброване графіком. Знаходять вміст загального та зв'язаного білірубіна.Метод Ендрассіка, Клеггорна і Грофа простий, зручний в практиці, не пов'язаний із застосуванням дефіцитних реактивів і є найбільш прийнятним для практичних лабораторій.Определеніе рекомендується приводити відразу ж після забору проб, щоб уникнути окислення білірубіну на світлі. Гемоліз сироватки знижує кількість білірубіну пропорційно присутності гемоглобіну. Отже, сироватка крові не повинна бути гемолізованих.
Ряд речовин - гідрокортизон, андрогени, еритроміцин, глюкокортикоїди, фенобарбітал, аскорбінова кислота - викликають інтерференцію.
Постоеніе калібрувального графіка при методі ендрассіка.
Спосіб I - Шелонг-Вендес використанням стабілізуючого властивості білка сироватки крові. Основний розчин білірубіну: в колбі місткістю 50 мл розчиняють 40 мг білірубіну в 30-35 мл 0,1 моль/л розчину карбонату натрію Na 2 CO 3 . Добре збовтують, не допускаючи утворення бульбашок. Доводять до 50 мл 0,1 моль/л розчином Nа 2 СО 3 і кілька разів перемішують. Розчин стійкий тільки протягом 10 хв від початку приготування. В подальшому відбувається окислення білірубіну. Робочий розчин білірубіну: до 13,9 мл свіжої негемолізірованной сироватки здорової людини додають 2 мл свіжоприготованого основного розчину білірубіну і 0,1 мл 4 моль/л розчину оцтової кислоти. Добре перемішують. При цьому виділяються бульбашки вуглекислого газу. Робочий розчин стійок протягом декількох днів. Цей розчин містить точно на 100 мг/л, або 171 мкмоль/л, білірубіну більше, ніж сироватка, узята для приготування розчину. Щоб виключити при розрахунках кількість білірубіну, що міститься в цій сироватці, при вимірюванні на фотометрі з величин екстинкції калібрувальних проб віднімають величини екстинкції відповідних розведень компенсаційної рідини. Для приготування компенсаційної рідини змішують 13,9 мл тієї ж сироватки, яка використовувалася для приготування калібрувального розчину білірубіну, 2 мл 0,1 моль/л розчину карбонату натрію і 0,1 мл 4 міль/л розчину оцтової кислоти. Для побудови калібрувального графіка готують ряд розведень із різним вмістом білірубіну. До отриманих разведениям додають по 1,75 мл кофеїнового реактиву і по 0,25 мл діазосмесі. При появі помутніння можна додати по 3 краплі 30%-ного розчину їдкого натру. Вимірювання проводять ...
