БІЛОРУСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ
РЕФЕРАТ
НА ТЕМУ:
" лабораторної діагностики гельмінтозів"
МІНСЬК, 2009
Для виявлення гельмінтів, їх фрагментів (проглоттід. з кодексів), личинок або яєць досліджують кал, сечу, мокроту, дуоденальне вміст, кров.
Дослідження випорожнень (копрологіческое дослідження) є найбільш поширеним, оскільки велика частина гельмінтів паразитує у людини в кишечнику або органах, пов'язаних з ним протоками, тому їх яйця або частини тіла виділяються з випорожненнями.
При копрологіческом аналізі необхідно суворо дотримуватися правила особистої гігієни, обпалювати петлі і скляні палички, стерилізувати посуд, скла та інструментарій, тримати в чистоті робоче місце.
Екскременти досліджують макроскопічно або мікроскопічно хоча виявлення в них паразитичних черв'яків або їх частин (гельмінтоскопія), а головним чином - яєць гельмінтів (гельмінтоовоскопія).
Макроскопічні методи
Огляд випорожнень.
При огляді випорожнень в них можна виявити гельмінтів, їх сколекси, обривки стробіли, проглоттіди, що виділяються самостійно або після дегельмінтизації. Цей метод особливо рекомендується для виявлення ентеробіозу, теніозу та тениаринхоза.
Екскременти доставляють у лабораторію в чистій скляній посуді або в сірникових коробках. На кожній коробці має бути етикетка з зазначенням прізвища, імені, віку і місця проживання обстежуваного.
Невеликі порції випорожнень перемішують з водою в плоскій ванні або в чашці Петрі. Їх дивляться при хорошому освітленні на темному тлі, при необхідності користуючись лупою.
Пінцетом або піпеткою витягають всі підозрілі освіти, переносять на предметне скло в краплю розведеного гліцерину або ізотонічного розчину хлориду натрію для подальшого вивчення.
При методі відстоювання всю досліджувану порцію випорожнень потрібно розмішати з водою і дати відстоятися в скляному циліндрі, потім обережно злити верхній шар рідини.
Так повторюють кілька разів. Після того, як рідина стане прозорою, її зливають, а осад переглядають у скляній ванні або чашці Петрі, як було зазначено вище.
Мікроскопічні методи.
Мікроскопія - основний метод дослідження випорожнень для виявлення яєць і личинок гельмінтів. Екскременти для аналізу повинні бути доставлені не пізніше доби після їх виділення. При порушенні цього правила діагноз поставити важко або неможливо у зв'язку з руйнуванням яєць і личинок. Для підвищення достовірності дослідження аналізи потрібно повторювати кілька разів щодня або з проміжками в 1-3 дні.
Нативний мазок.
Невеликий шматочок випорожнень переносять паличкою на предметне скло в краплю 50% водного розчину гліцерину (для його отримання змішують рівну кількість дистильованої води і гліцерину) і розтирають до отримання рівномірного прозорого мазка. На одному склі готують два мазка.
При невеликій кількості яєць у випорожненнях їх не завжди вдається виявити, тому застосування тільки цього методу не є повноцінним і достовірним.
Товстий мазок з целофаном (метод Като).
Принцип методу: яйця гельмінтів виявляють в товстому мазку випорожнень, проясненій гліцерином і підмальоване малахітової зеленню.
Попередньо гідрофільний целофан, завтовшки 22 МХМ, нарізають пластинками з розміром сторін 20x40 мм і занурюють на добу в розчин наступного складу: 6 мл 3% водного розчину малахітової зелені, 500 мл гліцерину і 500 мл 6% водного розчину фенола.3-5 мл зазначеної суміші достатньо для обробки 100 пластинок, які потім можна зберігати в цьому ж розчині в добре закритій посудині.
Хід дослідження.
100 мг випорожнень наносять на предметне скло, покривають обробленої, як описано вище, платівкою целофану і придавлюють гумовою пробкою так, щоб випорожнення не розтікалися-під целофану.
мікроскопування при малому або великому збільшенні необхідно проводити не пізніше, ніж через годину після приготування мазка, а в спекотну погоду - через 30-40 хвилин. Висихання препарату і тривалий просвітлююче дію гліцерину ускладнюють мікроскопування.
Метод Като дозволяє досліджувати значний обсяг випорожнень і з більшою ефективністю, ніж при звичайному нативному мазку. Цим методом можна виявити яйця аскариди, волосоголовці, лентеца, трематод, теніїд.
Однак для виявлення яєць анкилостомид і карликового ціп'яка, особливо при малій інтенсивності інвазії, метод Като недостатньо ефективний.
Метод закручування по Шульману.2-3 г випорожнень розмішують скляною паличкою круговими рухами з трьох-п'ятикратним кількістю фізіологічного розчину, не торкаючись стінок посудини. Яйця і личинки гельмінтів скупчуються в центрі.
Після закінчення перемішування краплю на кінці палички швидко переносять на предметне скло, закривають її покривним склом і досліджують під мікроскопом. Цим методом добре виявляються личинки гельмінтів.
Методи збагачення.
Методи збагачення засновані на різниці питомої ваги яєць та застосовуваного сольового розчину, що дозволяє виявляти незначну їх кількість. Якщо питома вага яєць більше питомої ваги рідини, то яйця концентруються в осаді, який досліджують під мікроскопом.
Цей метод осадження (седиментації) застосовують для яєць трематод. При більшому питомій вазі розчину яйця спливають на поверхню рідини, і тоді досліджують плівку. Це методи спливання (флотації). Вони найбільш ефективні для виявлення яєць анкилостомид, волосоголовці і карликового ціп'яка.
Метод Фюллеборна заснований на Спливання яєць гельмінтів в насиченому розчині NaCl з високою відносною щільністю. Для цього розчиняють 400 г NaCl в 1 л води при кип'ятінні. Відносна щільність розчину 1,18-1,22. Розчин зберігають в закритої бутлі.
Для проведення аналізу в банку об'ємом 30-50 мл поміщають 2-3 г випорожнень і при помішуванні паличкою доливають майже доверху насичений розчин хлориду натрію. Смужкою паперу швидко видаляють спливли великі частинки.
Через 45-60 хв. відстоювання дротяною петлею знімають поверхневу плівку і переносять її на предметне скло в краплю 50% водного розчину гліцерину. Готують кілька препаратів. Додатково переглядають 2-4 препарату з осаду, набираючи його очною піпеткою на 2 предметних скла.
Необхідність дослідження осаду обумовлена ​​тим, що яйця трематод і теніїд спливають дуже погано і можуть залишитися в осаді. Добре спливають яйця нематод (за винятком незапліднених яєць аскарид), карликового ціп'яка і лентеца.
До переваг цього методу відноситься його дешевизна і доступність до недоліків - необхідність перегляду препаратів з поверхневої плівки та осаду, а також тривалість відстоювання.
Метод Калантарян.
Замість насиченого розчину кухонної солі використовують насичений розчин азотнокислого натрію (1 кг селітри заливають; літром дистильованої води і кип'ятять до повного розчинення). Питома вага розчину близько 1,4.
Переваги методу: швидко спливають і виявляються в поверхневій плівці яйця більшості гельмінтів, що виключає необхідність дослідження осаду. Не спливають онкосфери теніїд і яйця трематод, що слід враховувати при дослідженнях з метою діагностики зазначених гельмінтозів. Висока вартість нітрату натрію обмежує застосування даного методу.
Метод Красильникова.
Під дією поверхнево-активних речовин, що входять а склад миючих засобів (детергентів), яйця гельмінтів звільняються від випорожнень і концентруються в осаді.
Попередньо готують 1% розчин прального порошку "Лотос". Для цього висушують порошок в сушильній шафі при 100 В° С протягом 1-2 годин, потім 10 г порошку розчиняють в 1 л водопровідної води. За відсутності "Лотоса" можна використовувати і інші пральні порошки, але кожного з них потрібно брати ...