Аллахвердієв А.М.
Літературнідані про способи синхронізації малярійних паразитів нечисленні і маютьряд обмежень.
Длясинхронізацій культур збудника тропічної малярії широко використовуєтьсясорбітану або його комбінація з желатином (Lambors et al., 1979; Kilejian, 1960).Сорбітол лізує еритроцити, заряджені зрілими формами паразита, а післясинхронізацій кільцеподібні стадії в культурах складають близько 95%. У тo жечас при використання сорбітолу в культурі лізує також значначастина інтактних еритроцитів, а синхронізація зберігається лише 1-2 покоління.
Вдійсному повідомленні представляються запропоновані нами способи синхронізаціїкультур еритроцитарних стадій збудника тропічної малярії Р. falciparum.Дані прийоми засновані на тому, що паразити не розвиваються повністю в середовищах, девідсутні будь необхідні компоненти. Ми використовували середовище МЕМ-4 (з10% сироваткою) і RPMI-1640 (без сироватки). Такі умови дозволяють паразитудосягти стадії трофозоіти, але не дозволяють перейти в стадію шизонти ізавершити повний цикл внутріерітроцітарного розвитку.
Нижченаводяться три способи синхронізації паразитів в культурі.
СпосібI. Культура малярійних паразитів з вихідною паразітеміей 2-3% з живильногосередовища RPMI-1640 переноситься в середу МЕМ-4. В даному середовищі через 72-96 годинсповільнюється розвиток паразитів, отже в культурі незалежно відвихідного складу популяцій паразитів залишається 92-97% трофозоітов. Після того,проводиться пересівши з вихідною паразітеміей 0, 3-0, 5% і культивується в середовищіRPMI-1640.
СпосібII. Синхронізація культур малярійних паразитів в даному способі здійснюєтьсяз використанням неповної живильного середовища RPMI-1640 (без сироватки.).Культура малярійних паразитів культивується в даному середовищі протягом 24-48годин. Після того в культурі трофозоіти стано
влять близько 95%, Потім проводятьпересівши з вихідною паразітеміей 0, 3-0, 5% і продовжують культивування вповної середовищі з 10% сироваткою.
СпосібIII. Відомо, що шляхом центрифугування в скляному капілярі еритроцити, зараженіP. falciparum можна розділити за віком (Л.Н. Грінберг, 1985). Виходячи з цихуявлень нами зроблена спроба синхронізувати культури малярійнихпаразитів з використанням даного способу.
Суспензіюзаражених еритроцитів P. falciparum з вихідною паразітеміей 5-6%;гематокритом 30-50% набирають у капіляр діаметром 1, 0 мм і довжиною 75 мм, закривають замазкою і центрифугують гематокритное центрифузі 10 хв при 15000 g. В залежності від плавучої щільності зрілі паразити концентруються у верхній частинікапіляра у вигляді темно-коричневого кольору (до поділу загальний склад популяційпаразитів був: 12, 5% кільцеподібних, 47, 5% трофозоітов і 40% шизонтів, апісля поділу у верхній частині вона відповідно становила: 1, 6, 8, 1; 90,3%). Дотримуючись стерильність, відокремлюють цю частину і вводять в культуру зі свіжимиеритроцитами. Через 24 години проводять пересівши з вихідною паразітеміей 0, 3-0, 5%.
Такимчином, запропоновані способи дозволяють синхронізувати культуру малярійнихпаразитів протягом 24-96 годин не використовуючи хімічні та ін агенти. Вониє більш фізіологічними і можуть бути використовувані для синхронізаціїкультури малярійних паразитів.
Список літератури
Дляпідготовки даної роботи були використані матеріали з сайту .ex-situ.ru/
